改造T細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）或T細(xì)胞受體（TCR），使其能夠特異性識(shí)別并攻擊癌細(xì)胞的方法，已成為血液系統(tǒng)惡性腫瘤的重要治療手段。EZH2是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶，通過(guò)催化H3K27me3來(lái)抑制基因表達(dá)，在多種癌癥中發(fā)揮促癌作用，并與免疫逃逸相關(guān)。EZH2抑制劑（tazemetostat）和EZH1/2雙重抑制劑（valemetostat）已在臨床試驗(yàn)中顯示出單藥抗腫瘤活性。作者探討了EZH1/2抑制劑在多種癌癥模型中對(duì)CAR-T和TCR-T細(xì)胞免疫療法的增強(qiáng)作用，發(fā)現(xiàn)EZH2抑制劑通過(guò)重編程腫瘤細(xì)胞的免疫原性，上調(diào)炎癥相關(guān)基因和T細(xì)胞趨化因子，顯著增強(qiáng)了CAR-T細(xì)胞的激活、增殖和腫瘤浸潤(rùn)能力，從而提高了抗腫瘤效果。此外，EZH1/2雙重抑制劑在某些癌癥模型中比單一EZH2抑制劑表現(xiàn)出更強(qiáng)的療效，提示其在克服腫瘤耐藥性方面具有潛在優(yōu)勢(shì)?？傊?，作者研究了EZH1/2抑制劑對(duì)多種癌癥模型中CAR-T和TCR-T細(xì)胞免疫療法的增強(qiáng)作用，揭示了EZH2抑制劑通過(guò)重編程腫瘤細(xì)胞的免疫原性，顯著提高免疫療法的療效，并為克服腫瘤耐藥性提供了新的策略。該研究于2025年2月發(fā)表在《Cancer Cell》，IF 48.8分。

技術(shù)路線(xiàn)：

主要研究結(jié)果：

1人類(lèi)B細(xì)胞淋巴瘤模型中EZH2抑制改善了CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤效果

       作者首先探索了EZH2抑制劑tazemetostat增強(qiáng)CART19免疫療法的潛力，因?yàn)檫@兩種療法均被批準(zhǔn)用于依賴(lài)EZH2生存的GC B細(xì)胞淋巴瘤。為此，作者選擇了四種GC來(lái)源的DLBCL淋巴瘤細(xì)胞系（OCI-Ly18和Toledo為野生型EZH2，SU-DHL-4和Karpas-422為突變型EZH2）。使用亞治療劑量的tazemetostat（OCI-Ly18、Toledo、SU-DHL-4為500 nM；Karpas-422為50 nM），在不影響細(xì)胞短期（≤3天）活力和增殖的情況下耗竭了H3K27ME3，從而能夠評(píng)估其與CART19療法的潛在聯(lián)合效果。為了確定最有效的給藥序列，作者測(cè)試了五種tazemetostat和CAR-T的不同給藥順序（圖1B）。最有效的方案（方案#1）包括預(yù)先用tazemetostat處理腫瘤細(xì)胞，并在CART19給藥后繼續(xù)暴露于tazemetostat（圖1C）。在該方案下，tazemetostat增強(qiáng)了CART19介導(dǎo)的對(duì)GC來(lái)源DLBCL細(xì)胞系的殺傷效果，并且這種增強(qiáng)作用與細(xì)胞的EZH2突變狀態(tài)無(wú)關(guān)。值得注意的是，tazemetostat還改善了對(duì)單藥CART19耐藥的Karpas-422細(xì)胞系的殺傷效果（圖1C）。這一發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了在CAR-T抗腫瘤效應(yīng)期間，需要對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理并維持EZH2抑制。單獨(dú)使用tazemetostat可降低H3K27me3水平（圖S2A），但在這些劑量下對(duì)短期淋巴瘤生長(zhǎng)無(wú)顯著影響（圖S2B）。除非另有說(shuō)明，后續(xù)所有體外實(shí)驗(yàn)均采用方案#1作為標(biāo)準(zhǔn)給藥方案。為了從遺傳學(xué)角度確認(rèn)這些發(fā)現(xiàn)，作者通過(guò)短發(fā)夾RNA在SU-DHL-4細(xì)胞（突變型EZH2）中建立了EZH2敲低（KD）模型（圖1D）。與小分子抑制結(jié)果一致，EZH2 KD增強(qiáng)了CART19介導(dǎo)的殺傷效果（圖1D）。隨后，作者利用對(duì)CART19高度耐藥的EZH2野生型DLBCL細(xì)胞系OCI-Ly18建立了異種移植模型來(lái)驗(yàn)證這些結(jié)果（圖1E）。將OCI-Ly18細(xì)胞皮下植入免疫缺陷的NSG小鼠后，隨機(jī)分為接受tazemetostat（200 mg/kg/天，持續(xù)約7周，口服）或?qū)φ杖軇┨幚淼慕M，隨后給予亞治療劑量的CART19（3.5×10?細(xì)胞/只小鼠，靜脈注射）或未轉(zhuǎn)導(dǎo)（UTD）細(xì)胞。與單獨(dú)使用CART19或tazemetostat相比，tazemetostat聯(lián)合CART19顯著改善了腫瘤控制（圖1F和S2C），并延長(zhǎng)了小鼠的生存時(shí)間（圖1G）。Tazemetostat對(duì)T細(xì)胞無(wú)毒性，并且未觀察到顯著的治療相關(guān)毒性（體重減輕或移植物抗宿主病[GVHD]；圖S2D）。相反，在第20天，接受tazemetostat治療的小鼠血液中CART19細(xì)胞水平顯著增加（圖1H）。

圖1：EZH2抑制使淋巴瘤細(xì)胞對(duì)CART19療法敏感

2 EZH2抑制增強(qiáng)淋巴瘤的免疫原性

       為了探究EZH2抑制如何增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的療效，作者首先關(guān)注其對(duì)癌細(xì)胞的影響。作者對(duì)經(jīng)過(guò)tazemetostat或?qū)φ杖軇╊A(yù)處理3天的GFP? OCI-Ly18和SU-DHL-4細(xì)胞（分別為野生型和突變型EZH2）進(jìn)行了RNA測(cè)序，隨后將這些細(xì)胞暴露于tazemetostat和未轉(zhuǎn)導(dǎo)（UTD）或CART19細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)（方案#1）。差異表達(dá)基因（DEGs）分析顯示，單獨(dú)使用tazemetostat誘導(dǎo)的DEGs數(shù)量最多，且主要為上調(diào)基因，這與EZH2的抑制性作用一致（圖S3B和S3C）。對(duì)僅暴露于CART19的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行基因集富集分析（GSEA）確認(rèn)了CART19介導(dǎo)殺傷的關(guān)鍵機(jī)制，包括干擾素-γ/α、通過(guò)核因子κB（NF-κB）的腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素（IL）-2-STAT5信號(hào)通路以及凋亡（圖S3D）。接受tazemetostat處理的組（Taz-UTD和Taz-CART19）表現(xiàn)出細(xì)胞周期和增殖相關(guān)基因（例如MYC靶基因、G2M檢查點(diǎn)和E2F靶基因）的下調(diào)。暴露于Taz-CART19的腫瘤細(xì)胞特異性上調(diào)了與炎癥（IL2RA）、B細(xì)胞激活/分化（例如KDM5B和BACH2）、黏附（例如OX40L/TNFSF4和CD80）、T細(xì)胞趨化（例如CXCL9、CXCL10和CXCL16）以及運(yùn)動(dòng)性（例如LMNA、CEACAM1、NRCAM和EPHB2；圖2A）相關(guān)的基因。

       為了進(jìn)一步探索EZH2抑制在體內(nèi)的效應(yīng)，作者采用了對(duì)CART19耐藥的OCI-Ly18異種移植淋巴瘤模型（圖2B）。在該模型中，OCI-Ly18細(xì)胞在第-18天皮下植入NSG小鼠，從第-15天開(kāi)始給予tazemetostat（150 mg/kg/天，口服）或?qū)φ杖軇┨幚?；在?span>0天給予CART19（4.0×10? CAR-T?細(xì)胞/只小鼠，靜脈注射）或未轉(zhuǎn)導(dǎo)（UTD）細(xì)胞。這一時(shí)間表允許tazemetostat對(duì)腫瘤進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的預(yù)處理和重編程。在CART輸注后第11天，在CART19組之間尚未出現(xiàn)顯著腫瘤大小差異之前，將腫瘤取出并進(jìn)行分析（圖2C）。在顯微鏡下評(píng)估時(shí)，與對(duì)照組相比，接受CART19和tazemetostat治療的小鼠腫瘤更小、壞死更多，并且T細(xì)胞浸潤(rùn)增加（圖2D）。對(duì)分選的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行差異基因表達(dá)分析顯示，EZH2抑制增加了MHC-I/II抗原（HLA-A、HLA-DOA和HLA-DOB）、共刺激分子（CXCL9、CXCL10和CD40）、黏附（ICAM1）、B細(xì)胞激活（FOS和JUN）、干擾素（IFN）反應(yīng)（STAT1-3和IRF2/7/9）以及p53介導(dǎo)的凋亡（FAS、ATF3、CASP3/4/7、MCL1和MDM2；圖2E）相關(guān)基因的表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)表明，EZH2抑制重塑了腫瘤的免疫原性，并調(diào)節(jié)了炎癥和凋亡通路，可能增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞之間的相互作用，最終有助于提高CAR-T的療效。

       為了評(píng)估EZH2抑制在染色質(zhì)水平上的效應(yīng)，作者對(duì)經(jīng)過(guò)tazemetostat或?qū)φ杖軇╊A(yù)處理3天的突變型EZH2 SU-DHL-4細(xì)胞進(jìn)行了ATAC測(cè)序，隨后將這些細(xì)胞暴露于tazemetostat和UTD或CART19細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)（方案#1）。

       最后，作者通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)了經(jīng)72小時(shí)處理后腫瘤細(xì)胞表面的CD19水平，以探究tazemetostat暴露后的蛋白變化。結(jié)果顯示，EZH2抑制并未改變CD19的表達(dá)（圖S3G）。然而，已知的EZH2靶基因CD58在經(jīng)tazemetostat處理的淋巴瘤細(xì)胞中上調(diào)，這一結(jié)果通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)得到了驗(yàn)證（圖S3H）。最后，為了功能驗(yàn)證EZH2抑制主要通過(guò)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞之間的相互作用來(lái)提高殺傷效果的假設(shè)，作者利用z-Movi平臺(tái)（LUMICKS）檢測(cè)了CART19細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的親和力（avidity）。親和力受多種因素影響，包括CAR的親和力、黏附分子和共刺激蛋白，它決定了T細(xì)胞與靶細(xì)胞界面的相互作用強(qiáng)度，影響CAR信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子分泌、增殖和持久性。事實(shí)上，tazemetostat預(yù)處理提高了CART19細(xì)胞對(duì)OCI-Ly18和SU-DHL-4細(xì)胞的親和力，表明結(jié)合效率增強(qiáng)（圖2F）。這一結(jié)果進(jìn)一步在通過(guò)shRNA敲低EZH2的SU-DHL-4細(xì)胞中得到驗(yàn)證，從而強(qiáng)化了EZH2抑制在增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞相互作用中的作用（圖2F）。

圖2：EZH2抑制調(diào)節(jié)淋巴瘤的免疫原性

3 EZH2抑制改善CAR-T細(xì)胞在遇到腫瘤時(shí)的擴(kuò)增和激活

       EZH2也在T細(xì)胞中表達(dá)，它調(diào)節(jié)T細(xì)胞的激活、增殖和分化，同時(shí)抑制促炎細(xì)胞因子。因此，作者研究了EZH2抑制對(duì)CAR-T細(xì)胞的影響。在持續(xù)信號(hào)傳導(dǎo)的CAR-T模型中，EZH2抑制可以防止CAR-T細(xì)胞耗竭后的恢復(fù)。還有研究表明，在小鼠（GC）淋巴瘤和黑色素瘤模型中，預(yù)先用tazemetostat處理的過(guò)繼轉(zhuǎn)移T細(xì)胞顯示出更強(qiáng)的抗腫瘤活性。

       作者首先研究了在腫瘤細(xì)胞預(yù)先用tazemetostat處理后，CAR-T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞在殺傷實(shí)驗(yàn)中同時(shí)暴露于藥物（方案#1）時(shí)，tazemetostat對(duì)CAR-T細(xì)胞的影響。首先，作者評(píng)估了tazemetostat對(duì)CART19激活、長(zhǎng)期腫瘤控制、擴(kuò)增和記憶形成的影響。體外實(shí)驗(yàn)中，tazemetostat顯著增加了CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌（IFN-γ、TNF和IL-2），增強(qiáng)了長(zhǎng)期殺傷能力，并促進(jìn)了與預(yù)先用tazemetostat處理的腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的擴(kuò)增。此外，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，經(jīng)tazemetostat處理的CART19細(xì)胞中效應(yīng)記憶亞群的比例增加。相反，僅將CAR-T細(xì)胞暴露于tazemetostat并未導(dǎo)致功能增強(qiáng)，如之前所示。為了評(píng)估CAR-T細(xì)胞隨時(shí)間的功能變化，作者進(jìn)行了再挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)。在此實(shí)驗(yàn)中，CART19細(xì)胞與SU-DHL-4細(xì)胞共培養(yǎng)，后者要么未處理，要么預(yù)先用tazemetostat處理。未處理的腫瘤細(xì)胞在第4天、第7天和第11天重新引入，以觸發(fā)CAR-T細(xì)胞功能障礙。值得注意的是，在此模型中，與單獨(dú)使用CART19相比，聯(lián)合使用tazemetostat的CART19在維持長(zhǎng)期細(xì)胞毒性活性和擴(kuò)增方面表現(xiàn)出更高的能力，而單獨(dú)的CART19則顯示出殺傷能力減弱和增殖能力較差。

       基于tazemetostat通過(guò)腫瘤重編程增強(qiáng)CART19療效的發(fā)現(xiàn)，作者進(jìn)一步研究了體內(nèi)腫瘤浸潤(rùn)性CART19細(xì)胞的特征。在CART19輸注前15天，用亞治療劑量的tazemetostat或?qū)φ杖軇╊A(yù)處理腫瘤，以實(shí)現(xiàn)通過(guò)EZH2抑制對(duì)腫瘤細(xì)胞的重編程，并在CART19輸注后第11天對(duì)腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞RNA測(cè)序（scRNA-seq）。tazemetostat處理的腫瘤表現(xiàn)出更高的T細(xì)胞浸潤(rùn)，并且基于轉(zhuǎn)錄特征的UMAP分析揭示了七個(gè)不同的T細(xì)胞亞群，包括富含細(xì)胞毒性（例如IFNG和GZMB）和細(xì)胞周期（TOP2A和PCNA）標(biāo)記物的簇。在兩組中，腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞均表現(xiàn)出高水平的CD8A表達(dá)，表明細(xì)胞毒性T細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境（TME）中占主導(dǎo)地位。對(duì)tazemetostat處理的腫瘤中的CART19細(xì)胞進(jìn)行基因集富集分析（GSEA）顯示，激活和細(xì)胞毒性基因（例如GZMB、PRF1、IFNG和CD69）上調(diào)，而耗竭標(biāo)記物（例如LAIR2）下調(diào)，與對(duì)照組相比（圖3F）。這些發(fā)現(xiàn)表明，EZH2抑制增強(qiáng)了T細(xì)胞的浸潤(rùn)，并促進(jìn)了腫瘤內(nèi)CART19細(xì)胞的腫瘤反應(yīng)性和細(xì)胞毒性表型。

       為了進(jìn)一步研究EZH2抑制對(duì)血液中CART19細(xì)胞的影響，作者使用最初的模型分析了外周血中的循環(huán)CART19細(xì)胞，在該模型中，tazemetostat和CART19的聯(lián)合使用改善了腫瘤控制并延長(zhǎng)了生存期。在接受tazemetostat治療的小鼠中觀察到CART19細(xì)胞的擴(kuò)增增加。在單細(xì)胞RNA測(cè)序中，UMAP分析顯示了七個(gè)具有不同特征的簇。CD8A表達(dá)在簇3中占主導(dǎo)地位，而其他簇則以CD4表達(dá)為特征。簇1和簇2在tazemetostat處理的小鼠中更為豐富，富含與激活的幼稚/早期記憶狀態(tài)、效應(yīng)功能、抗凋亡和糖酵解相關(guān)的基因。相比之下，簇0和簇4在對(duì)照溶劑處理的小鼠中更為常見(jiàn)，表達(dá)與終末效應(yīng)表型和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）/Smad3通路相關(guān)的基因，該通路抑制CD4 T細(xì)胞的增殖和共刺激（圖3G）。這些發(fā)現(xiàn)表明，在tazemetostat存在的情況下，腫瘤部位的CART19細(xì)胞表現(xiàn)出效應(yīng)表型，而循環(huán)的CD4? T細(xì)胞則保持更幼稚/早期記憶的狀態(tài)，這與增加的持久性一致。

       最后，作者直接且單獨(dú)研究了tazemetostat對(duì)CAR-T細(xì)胞的影響。首先，作者測(cè)量了在照射的OCI-Ly18細(xì)胞層上培養(yǎng)的CAR-T細(xì)胞在不同濃度tazemetostat下的增殖情況。在這種情況下，EZH2抑制并未影響CART19細(xì)胞的增殖。此外，如之前所示，包括CAR-T細(xì)胞預(yù)先暴露于tazemetostat的治療方案#4和#5并未顯著改善CAR-T細(xì)胞的功能。進(jìn)一步地，在CART19制造過(guò)程中加入tazemetostat并未影響CART19細(xì)胞的活性、擴(kuò)增或殺傷能力。然后，作者使用CRISPR-Cas9技術(shù)生成了EZH2敲除（EZH2-KO）的CART19細(xì)胞。值得注意的是，與野生型CART19細(xì)胞相比，EZH2-KO的CART19細(xì)胞在體外顯示出相當(dāng)?shù)臍芰?。此外，?dāng)SU-DHL-4細(xì)胞預(yù)先用tazemetostat處理后，暴露于野生型或EZH2-KO的CART19細(xì)胞（方案#1）時(shí)，tazemetostat仍然以類(lèi)似的方式增強(qiáng)了兩組的細(xì)胞毒性活性。

       綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)表明，tazemetostat通過(guò)EZH2抑制對(duì)腫瘤細(xì)胞的主要益處是重塑它們的免疫原性，從而促進(jìn)CART19細(xì)胞的更好激活。然而，EZH2抑制并未削弱CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤效果。

圖3：EZH2抑制增強(qiáng)了CART19的細(xì)胞毒性并誘導(dǎo)更幼稚/早期記憶表型

4 EZH2和EZH1/EZH2抑制劑增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞和TCR T細(xì)胞療法對(duì)多種液體和實(shí)體腫瘤的抗腫瘤效果

       鑒于EZH2失調(diào)在液體和實(shí)體癌癥中均有明確的作用，作者試圖探索EZH2抑制是否能夠廣泛增強(qiáng)多種CAR-T產(chǎn)品的CAR-T免疫療法的效果。令人驚訝的是，EZH2抑制顯著改善了模型中的CAR-T介導(dǎo)的殺傷效果（序列#1，圖4A）。在血液惡性腫瘤中，EZH2是多發(fā)性骨髓瘤（MM）進(jìn)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控、抗凋亡以及MM細(xì)胞的侵襲性行為。為了評(píng)估EZH2抑制是否能夠增強(qiáng)針對(duì)MM的CAR-T療法的效果，作者測(cè)試了tazemetatost與抗BCMA CAR-T細(xì)胞的聯(lián)合應(yīng)用。值得注意的是，EZH2抑制顯著增強(qiáng)了抗BCMA CAR-T細(xì)胞的長(zhǎng)期殺傷能力（序列#1，圖4B）。

       由于EZH2在急性髓系白血病（AML）細(xì)胞分化中發(fā)揮作用，并且能夠增強(qiáng)對(duì)其他療法的敏感性，作者還在AML（KG-1和THP-1）中評(píng)估了抗CD33 CAR-T細(xì)胞與EZH2抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用。在這一模型中，EZH2抑制也導(dǎo)致了CAR-T細(xì)胞體外殺傷能力的增強(qiáng)（序列#1，圖4C）。這些發(fā)現(xiàn)共同強(qiáng)調(diào)了EZH2抑制在廣泛增強(qiáng)多種血液惡性腫瘤CAR-T療法中的潛力。

       為了評(píng)估EZH2抑制在血液癌癥CAR-T免疫療法之外的潛在影響，作者研究了在已知依賴(lài)EZH2的實(shí)體腫瘤中EZH2抑制的效果，例如HER2+卵巢癌、前列腺癌和肉瘤。癌細(xì)胞（SKOV-3和PC3）預(yù)先用tazemetostat處理，并在HER2靶向CAR-T細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷過(guò)程中繼續(xù)使用該藥物（序列#1），作者觀察到CAR-T細(xì)胞殺傷能力在長(zhǎng)期顯著增強(qiáng)（圖4D）。此外，鑒于tazemetostat已獲得FDA批準(zhǔn)用于上皮樣肉瘤，作者將研究擴(kuò)展到A673肉瘤細(xì)胞系，并構(gòu)建了帶有抗HLA-A*02:01-LOXHD1 TCR抗原的TCR T細(xì)胞。在這一模型中，tazemetostat顯著增強(qiáng)了TCR T細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果（圖4E）。因此，EZH2抑制在多種實(shí)體腫瘤和多樣化的過(guò)繼T細(xì)胞免疫療法中顯示出廣闊的前景。

       作者假設(shè)，由于EZH1在EZH2被抑制時(shí)的代償作用以及EZH1在非增殖細(xì)胞中的表達(dá)，將EZH1與EZH2抑制相結(jié)合可以進(jìn)一步增強(qiáng)CAR-T療法的效果。作者選擇了valemetostat的次優(yōu)劑量，并觀察到它顯著增強(qiáng)了CART19對(duì)腫瘤的殺傷效果（圖4F）。在各種valemetostat和CART19給藥方案（序列#1-#5；圖4F）中，預(yù)先孵育腫瘤細(xì)胞并持續(xù)藥物存在是最有效的方案（圖4F，序列#1）。與單一抑制劑tazemetostat不同，同時(shí)將CART19/Val給予腫瘤細(xì)胞顯示出增加殺傷，的趨勢(shì)而預(yù)先用valemetostat孵育CART19細(xì)胞，隨后在殺傷過(guò)程中持續(xù)治療（序列#5）增強(qiáng)了抗腫瘤效果，表明雙重EZH1/EZH2抑制比單獨(dú)抑制EZH2對(duì)腫瘤和T細(xì)胞具有更大和更快的效果。作者評(píng)估了valemetostat對(duì)CART19連續(xù)殺傷效率和抗耗竭能力的影響。在再挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)中，CART19細(xì)胞與SUDHL-4細(xì)胞共同培養(yǎng)，后者要么未處理，要么預(yù)先用valemetostat處理。在4、7和11天的間隔后重新引入未處理的腫瘤細(xì)胞，以評(píng)估CART19細(xì)胞隨時(shí)間的細(xì)胞毒性。在存在valemetostat的情況下，CART19細(xì)胞的殺傷效果在初始和持續(xù)腫瘤殺傷方面均優(yōu)于對(duì)照組，顯示出增強(qiáng)的細(xì)胞毒性，且未損害持續(xù)細(xì)胞毒性潛力（圖4G）。

       為了評(píng)估雙重EZH1/EZH2抑制對(duì)其他CAR-T產(chǎn)品和疾病的影響，作者測(cè)試了valemetostat與抗BCMA CAR-T細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系RPMI-8226。次優(yōu)劑量的valemetostat能夠顯著增強(qiáng)CARTBCMA細(xì)胞的長(zhǎng)期殺傷效率（圖4H）。作者建立了一個(gè)RPMI-8226的骨內(nèi)原位異種移植模型。在骨內(nèi)腫瘤植入后3天，小鼠開(kāi)始接受valemetostat（100 mg/kg，口服，每天一次，持續(xù)5周）或載體。在RPMI-8226植入后1周，小鼠被隨機(jī)分配接受CARTBCMA（0.8×10^6/只小鼠，靜脈注射）。在這個(gè)模型中，持續(xù)給予valemetostat改善了CARTBCMA對(duì)腫瘤的控制，促進(jìn)了血液中T細(xì)胞的擴(kuò)增，并且沒(méi)有顯著的治療相關(guān)毒性（體重減輕或GVHD）（圖4I、4J）。此外，接受CARTBCMA/valemetostat聯(lián)合治療的動(dòng)物顯示出細(xì)胞毒性細(xì)胞因子IFN-γ的血清水平升高，表明T細(xì)胞的激活和細(xì)胞毒性反應(yīng)增強(qiáng)（圖4K）。

       總之，作者研究了EZH2/EZH1抑制在多種人類(lèi)癌癥的臨床前模型中的作用，這些模型接受了過(guò)繼細(xì)胞療法。在所有測(cè)試的模型中，EZH2/EZH1抑制均增強(qiáng)了CAR和TCR-T的抗腫瘤效果。在淋巴瘤模型中，EZH2抑制調(diào)節(jié)了淋巴瘤細(xì)胞的免疫原性，使其更具免疫原性，并更有效地激活CAR-T細(xì)胞。

圖4：EZH2及EZH1/EZH2抑制使血液腫瘤和實(shí)體腫瘤模型對(duì)免疫療法產(chǎn)生敏感性

結(jié)論：

       綜上所述，在這項(xiàng)研究中，作者證明了抑制EZH2或同時(shí)抑制EZH1/EZH2能夠顯著增強(qiáng)CAR-T和TCR-T細(xì)胞過(guò)繼免疫療法在多種癌癥模型中的抗腫瘤效果，這些模型包括液體腫瘤和實(shí)體腫瘤。作者的研究揭示了一種通過(guò)使用EZH1/EZH2抑制劑來(lái)增強(qiáng)過(guò)繼T細(xì)胞療法的方法。此外，該研究還為EZH2以及EZH1/EZH2在免疫治療過(guò)程中調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞的作用機(jī)制提供了見(jiàn)解。

實(shí)驗(yàn)方法：

       皮下或原位移植瘤模型，RNA-seq，scRNA-seq，ATAC-seq，細(xì)胞培養(yǎng)，WB，ELISA，免疫熒光，流式

參考文獻(xiàn)：

       Porazzi P, Nason S, Yang Z, Carturan A, Ghilardi G, Guruprasad P, Patel RP, Tan M, Padmanabhan AA, Lemoine J, Fardella E, Zhang Y, Pajarillo R, Chen L, Ugwuanyi O, Markowitz K, Delman D, Angelos MG, Shestova O, Isshiki Y, Blanchard T, Béguelin W, Melnick AM, Linette GP, Beatty GL, Carreno BM, Cohen I, Paruzzo L, Schuster SJ, Ruella M. EZH1/EZH2 inhibition enhances adoptive T cell immunotherapy against multiple cancer models. Cancer Cell. 2025 Feb 20:S1535-6108(25)00031-5. doi: 10.1016/j.ccell.2025.01.013IF: 48.8 Q1 . Epub ahead of print. PMID: 39983725.