早期發(fā)現(xiàn)和手術治療對胃癌（GC）取得良好療效至關重要，IV期和復發(fā)性GC預后較差，所以需要新的GC治療方法。之前的研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物組是GC的一個致病因素，因此本文對胃癌患者的腸道微生物組進行了研究，并試圖通過調節(jié)微生物組代謝物來逆轉GC患者免疫細胞和癌細胞的免疫抑制,評估GC患者外周血免疫細胞中程序性死亡配體1（PD-L1）和白細胞介素（IL）-10的水平。通過共聚焦顯微鏡觀察癌癥組織的染色切片,利用健康人和GC患者的糞便樣本分析腸道微生物組。通過將晚期GC（AGC）患者的外周血單核細胞（PBMC）注射到NSG小鼠體內(nèi)，然后再注射AGS細胞，建立人源化模型。與健康對照組相比，GC患者免疫細胞中PD-L1和IL-10的表達水平更高,腸道菌群中糞桿菌和雙歧桿菌的豐度較低,免疫抑制因子在腫瘤組織的免疫細胞和腫瘤細胞中的水平均有所升高。最近的研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鹽是一種具有代表性的微生物代謝物，具有抗腫瘤作用，并與增強免疫治療的治療應答相關。本文評估了丁酸鹽在人源化小鼠模型中的抗腫瘤作用，結果表明丁酸鹽可抑制免疫細胞中PD-L1和IL-10的表達水平。此外，在人源化小鼠模型中，AGC患者的PBMCs顯示免疫抑制因子水平升高。丁酸鹽抑制了小鼠的腫瘤生長。文章首次發(fā)現(xiàn)丁酸鹽作為胃癌的代表性代謝物，其抗腫瘤作用是通過調節(jié)免疫抑制標志物的表達實現(xiàn)的，為GC的治療方法的開發(fā)提供了新思路。本文于2023年12月發(fā)表在《Gut Microbes》，IF：12.2。

技術路線

主要實驗結果：

1.AGC患者樹突狀細胞和巨噬細胞中免疫抑制標志物水平升高

眾所周知，包括胃癌在內(nèi)的各種癌癥都會增加免疫抑制標記物的表達。文章研究了GC患者的PBMC（巨噬細胞和樹突狀細胞）和癌粘膜中免疫抑制標記物（包括PD-L1和IL-10）的表達水平。與EGC患者相比，AGC患者的PBMC（圖1）和癌癥粘膜（圖2）中有更多的PD-L1和IL-10表達的巨噬細胞（CD68+細胞）、PD-L1和IL-10表達的樹突狀細胞（CD11c+細胞）以及PD-L1和IL-10表達的巨噬細胞。數(shù)據(jù)表明，免疫抑制與GC的進展有關。

圖1.AGC患者PBMC中免疫抑制標志物水平升高

圖2.AGC患者腫瘤粘膜中免疫抑制標志物水平升高

2.GC患者腸道微生物組的菌群失調

為了研究GC是否與腸道微生物組的變化有關，對20名HCs和12名GC患者的糞便樣本進行了測序。與HCs相比，GC患者的微生物群菌群種類和豐富度較低（圖3a）。使用基于Bray-Curtis相異性（β多樣性）的主坐標分析法評估并比較了GC患者和HC之間腸道微生物組組成的整體多樣性。HC和GC患者的腸道菌群存在明顯差異（圖3b）。GC患者的腸道微生物組成發(fā)生了改變（圖4）。在門一級，與HCs相比，GC患者的放線菌和芽孢桿菌含量較低，而類桿菌含量較高（圖4a）。在科一級，與丁酸生產(chǎn)有關的雙歧桿菌和瘤胃球菌在GC患者中的豐度低于HC患者，而類桿菌的豐度高于HC患者（圖4b）。在菌屬水平上，GC患者腸道菌群中產(chǎn)生丁酸鹽的細菌也有所減少（圖4c）。GC患者和HC線性判別分析（LDA）得分之間的細菌類群相對豐度在屬一級也存在明顯差異（圖4d）。與HC相比，GC患者體內(nèi)糞桿菌、柯林斯菌、雙歧桿菌、f_瘤胃球菌和瘤胃球菌（即產(chǎn)丁酸菌株）的豐度顯著降低（圖4e）。此外，與EGC相比，AGC患者中糞桿菌、柯林斯菌、雙歧桿菌、f_瘤胃球菌和瘤胃球菌（即產(chǎn)丁酸菌株）的豐度也明顯降低（圖4f）。

圖3.GC患者的腸道微生物群譜

圖4.GC患者體內(nèi)微生物豐度的差異

3.丁酸鹽治療抑制GC患者PBMC中PD-L1和IL-10的表達

包括糞桿菌在內(nèi)的丁酸菌株在GC患者中的豐度低于HCs。文章研究了丁酸鹽和糞桿菌在GC患者中的作用。給GC患者的PBMC和THP-1細胞注射丁酸鹽和糞桿菌，可減少表達PD-L1和IL-10的巨噬細胞數(shù)量（圖5a、b）。此外，丁酸鹽和糞桿菌還能降低IL-10的濃度（圖5c）。

圖5.丁酸鹽降低PD-L1和IL-10水平

4.丁酸鹽抑制GC細胞的生長

接下來，文章研究了丁酸鹽對胃癌細胞生長的影響。文章作者用丁酸鹽培養(yǎng)胃癌細胞株AGS細胞，并測量細胞的生長情況。在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中，丁酸鹽明顯抑制了AGS細胞的生長（圖6a）。隨后研究了丁酸鹽對GC細胞體內(nèi)生長的影響。為此在有或無丁酸鹽條件下向人源化腫瘤小鼠模型皮下注射了來自健康對照組或GC患者的AGS細胞和PBMCs（圖6b、c）。丁酸鹽能明顯減小腫瘤大小，降低免疫抑制標志物（PD-L1和IL-10）、其調節(jié)因子（NF-KB和STAT3）以及癌癥組織中的癌生長因子（VEGF和GDF-15）的水平（圖6d、e）。數(shù)據(jù)表明，丁酸鹽可通過抑制胃癌癌細胞的生長而發(fā)揮潛在的治療作用。

圖6.丁酸鹽抑制腫瘤細胞生長

實驗方法：

微生物組學分析、免疫染色切片、流式細胞術、PCR擴增，DNA測序、共聚焦顯微鏡分析、免疫組織化學檢測、人源化小鼠模型、酶聯(lián)免疫吸附測定

參考文獻：

Lee SY, Jhun J, Woo JS, Lee KH, Hwang SH, Moon J, Park G, Choi SS, Kim SJ, Jung YJ, Song KY, Cho ML. Gut microbiome-derived butyrate inhibits the immunosuppressive factors PD-L1 and IL-10 in tumor-associated macrophages in gastric cancer. Gut Microbes. 2024 Jan-Dec;16(1):2300846. doi: 10.1080/19490976.2023.2300846. Epub 2024 Jan 10. PMID: 38197259; PMCID: PMC10793689.