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lncRNA與病毒感染的套路

欄目:最新研究動態(tài) 發(fā)布時間:2020-07-06
長非編碼RNA(lncRNA)參與各種生物學(xué)和病理學(xué)過程。乙型肝炎病毒(HBV)是一種具有部分雙鏈的DNA病毒...

    長非編碼RNA(lncRNA)參與各種生物學(xué)和病理學(xué)過程。乙型肝炎病毒(HBV)是一種具有部分雙鏈的DNA病毒,可發(fā)展為慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌的危險因素。最近報道表明,某些lncRNA在HBV相關(guān)疾病中起著重要作用。lncRNA與病毒感染的研究套路你曉得嗎?這篇文章為您揭曉。
思維路線:

結(jié)果:
1. HBV感染誘導(dǎo)lncRNA HOTTIP上調(diào)
    HBV(+)HCC組織和HCC細胞中HOTTIP的水平明顯升高,HBV初次感染后HOTTIP升高,而繼發(fā)感染后HOTTIP升高更多。這些結(jié)果表明,HOTTIP在HBV陽性組織和細胞中上調(diào)。

2. HBV DNA聚合酶通過CREB1誘導(dǎo)HOTTIP表達
    將HOTTIP啟動子克隆到螢光素酶報道載體(HOTTIP-LUC +)中,熒光活性因pHBV1.3的存在而增加,pHBV1.3還增加HOTTIP的mRNA水平,HBV DNA pol(DNA聚合酶)可顯著增加HOTITP的mRNA水平。將HOTTIP啟動子與表達不同HBV蛋白質(zhì)的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Huh7細胞,檢測它們對HOTTIP表達的影響,發(fā)現(xiàn)HBV DNA pol確實增加HOTTIP啟動子活動,其他效果不明顯。推定兩個CREB1結(jié)合位點存在于HOTTIP啟動子區(qū)域,Hueb7細胞中CREB1的過表達激活HOTTIP啟動子,突變CREB1的結(jié)合位點時,HOTTIP-Luc熒光活性被削弱。CREB1的異位表達增加Huh7細胞中HOTTIP mRNA的水平。HBV DNA pol可消除CREB1突變對HOTTIP啟動子活性的促進作用。轉(zhuǎn)錄抑制劑Dactinomycin D處理Huh7細胞后,CREB1 mRNA的穩(wěn)定性增強,提示HBV DNA pol對CREB1的上調(diào)可能是由于CREB1 mRNA穩(wěn)定性增加。這些表明HBV DNA pol綁定并穩(wěn)定CREB1 mRNA以促進其翻譯,進而誘導(dǎo)HOTTIP表達。

3. HOTTIP和HBV DNA pol抑制HBV復(fù)制
    研究HOTTIP對HBV基因表達和復(fù)制的影響。螢光素酶報告基因檢測表明,過表達HOTTIP抑制HBV Enh I / Xp活性,HOTTIP敲低則增加;但是,HBV SP1,Sp2和CP的活性沒有明顯變化。培養(yǎng)上清液中的HBsAg和HBeAg水平在HOTTIP過表達后減少,在HOTTIP敲低后增加。HOTTIP過表達的細胞中HBV pgRNA和總RNA減少,上清液中HBV DNA拷貝減少,DNA復(fù)制中間產(chǎn)物也減少。在HOTTIP敲低后效果相反。這些結(jié)果證明HBV DNA pol促進HOTTIP表達,并且HOTTIP反過來會抑制HBV復(fù)制。HBV DNA pol的過表達顯著降低HBsAg和HBeAg的水平,降低pgRNA、總RNA和HBV DNA拷貝。這些表明HOTTIP和HBV DNA pol可抑制HBsAg和HBeAg的產(chǎn)生以及HBV基因組復(fù)制。

4. HOXA13表達與HBV復(fù)制有關(guān)
    將pHBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到Huh7細胞中,HOXA13水平升高。HOXA13敲低可提高pHBV1.3轉(zhuǎn)染的Huh7中HBsAg、HBeAg的水平、HBV DNA拷貝水平。HOXA13抑制HBV Enh I / Xp活性,而敲低HOXA13則增強。HOXA13降低DNA復(fù)制中間體的水平。這些表明HOXA13抑制HBsAg、HBeAg的產(chǎn)生和HBV基因組復(fù)制。

5. HOXA13通過與HBV Enh I / Xp結(jié)合來介導(dǎo)HOTTIP對HBV復(fù)制的影響
    HOTTIP可通過促進肝細胞中HOXA13的表達發(fā)揮其功能。HOTTIP過表達導(dǎo)致HOXA13蛋白質(zhì)和mRNA積累,敲除HOTTIP具有相反作用。探討HOXA13促進HBV基因表達復(fù)制的機制,發(fā)現(xiàn)HOXA13過表達抑制HBV Enh I / Xp活性,突變HOXA13結(jié)合位點消除對HOTTIP和HOXA13對Enh I / Xp活性的刺激作用。這些證明HOXA13通過直接綁定到Enh I / Xp以介導(dǎo)HOTTIP對HBV病毒蛋白產(chǎn)生和復(fù)制。



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